(Flowcytometri, FCM) er en celleanalysator, der måler fluorescensintensiteten af farvede cellemarkører. Det er en højteknologisk teknologi udviklet baseret på analysen og sortering af enkeltceller. Det kan hurtigt måle og klassificere størrelsen, intern struktur, DNA, RNA, proteiner, antigener og andre fysiske eller kemiske egenskaber af celler og kan være baseret på indsamlingen af disse klassifikationer.
Flowcytometer består hovedsageligt af de følgende fem dele:
1 Flow Chamber and Fluidics System
2 laser lyskilde og stråleformningssystem
3 optisk system
4 Elektronik, opbevaring, display og analysesystem
5 cellesorteringssystem
Blandt dem er laser -excitation i laserlyskilden og stråleformningssystemet den vigtigste måling af fluorescenssignaler i flowcytometri. Intensiteten af excitationslyset og eksponeringstiden er relateret til intensiteten af fluorescenssignalet. Laser er en sammenhængende lyskilde, der kan tilvejebringe enkeltbølgelængde, højintensiv og højstabilitetsoplysning. Det er den ideelle excitation -lyskilde til at imødekomme disse krav.
Der er to cylindriske linser mellem laserkilden og flowkammeret. Disse linser fokuserer en laserstråle med et cirkulært tværsnit, der udsendes fra laserkilden til en elliptisk stråle med et mindre tværsnit (22 μm × 66 um). Laserenergien inden for denne elliptiske stråle distribueres i henhold til en normal fordeling, hvilket sikrer en ensartet belysningsintensitet for celler, der passerer gennem laserdetektionsområdet. På den anden side består det optiske system af flere sæt linser, pinholes og filtre, som kan være groft opdelt i to grupper: opstrøms og nedstrøms for flowkammeret.
Det optiske system foran strømningskammeret består af en linse og pinhole. Hovedfunktionen af linsen og pinhole (normalt to linser og en pinhole) er at fokusere laserstrålen med et cirkulært tværsnit, der udsendes af laserkilden i en elliptisk stråle med et mindre tværsnit. Dette distribuerer laserenergien i henhold til en normal fordeling, hvilket sikrer en ensartet belysningsintensitet for celler over laserdetektionsområdet og minimerer interferens fra omstrejfende lys.
Der er tre hovedtyper af filtre:
1: Long Pass Filter (LPF) - Tillader kun lys med bølgelængder højere end en bestemt værdi at passere.
2: Kortpasfilter (SPF) - tillader kun lys med bølgelængder under en bestemt værdi at passere.
3: Bandpass -filter (BPF) - tillader kun lys i et specifikt bølgelængdeområde at passere.
Forskellige kombinationer af filtre kan dirigere fluorescenssignaler ved forskellige bølgelængder til individuelle fotomultiplikatorrør (PMT'er). For eksempel er filtre til påvisning af grøn fluorescens (FITC) foran PMT LPF550 og BPF525. De filtre, der bruges til at detektere orange-rød fluorescens (PE) foran PMT, er LPF600 og BPF575. Filtrene til påvisning af rød fluorescens (CY5) foran PMT er LPF650 og BPF675.
Flowcytometri bruges hovedsageligt til cellesortering. Med fremme af computerteknologi, udvikling af immunologi og opfindelsen af monoklonal antistofteknologi bliver dets anvendelser inden for biologi, medicin, apotek og andre områder stadig mere udbredt. Disse anvendelser inkluderer celledynamikanalyse, celle -apoptose, celletypning, tumordiagnose, lægemiddeleffektivitetsanalyse osv.
Posttid: SEP-21-2023
