(Flowcytometri, FCM) er en celleanalysator, der måler fluorescensintensiteten af farvede cellemarkører. Det er en højteknologisk teknologi udviklet baseret på analyse og sortering af enkeltceller. Den kan hurtigt måle og klassificere cellernes størrelse, indre struktur, DNA, RNA, proteiner, antigener og andre fysiske eller kemiske egenskaber og kan baseres på indsamlingen af disse klassifikationer.
Flowcytometeret består hovedsageligt af følgende fem dele:
1 Flowkammer og fluidiksystem
2 Laserlyskilde og stråleformningssystem
3 Optisk system
4 Elektronik, lagring, display og analysesystem
5 Cellesorteringssystem
Blandt disse er laserexcitation i laserlyskilden og stråledannelsessystemet den primære måling af fluorescenssignaler i flowcytometri. Intensiteten af excitationslyset og eksponeringstiden er relateret til intensiteten af fluorescenssignalet. Laser er en kohærent lyskilde, der kan give belysning med en enkelt bølgelængde, høj intensitet og høj stabilitet. Det er den ideelle excitationslyskilde til at opfylde disse krav.
Der er to cylindriske linser mellem laserkilden og strømningskammeret. Disse linser fokuserer en laserstråle med et cirkulært tværsnit, der udsendes fra laserkilden, til en elliptisk stråle med et mindre tværsnit (22 μm × 66 μm). Laserenergien i denne elliptiske stråle er fordelt i henhold til en normalfordeling, hvilket sikrer ensartet belysningsintensitet for celler, der passerer gennem laserdetekteringsområdet. På den anden side består det optiske system af flere sæt linser, pinholes og filtre, som groft kan opdeles i to grupper: opstrøms og nedstrøms for strømningskammeret.
Det optiske system foran strømningskammeret består af en linse og et nålehul. Linsens og nålehullets hovedfunktion (normalt to linser og et nålehul) er at fokusere laserstrålen med et cirkulært tværsnit, der udsendes af laserkilden, til en elliptisk stråle med et mindre tværsnit. Dette fordeler laserenergien i henhold til en normalfordeling, hvilket sikrer ensartet belysningsintensitet for celler på tværs af laserdetekteringsområdet og minimerer interferens fra spredt lys.
Der er tre hovedtyper af filtre:
1: Langpasfilter (LPF) - tillader kun lys med bølgelængder højere end en bestemt værdi at passere igennem.
2: Kortpasfilter (SPF) - tillader kun lys med bølgelængder under en bestemt værdi at passere igennem.
3: Båndpasfilter (BPF) - tillader kun lys i et bestemt bølgelængdeområde at passere igennem.
Forskellige kombinationer af filtre kan rette fluorescenssignaler ved forskellige bølgelængder til individuelle fotomultiplikatorrør (PMT'er). For eksempel er filtre til at detektere grøn fluorescens (FITC) foran PMT LPF550 og BPF525. Filtrene, der bruges til at detektere orange-rød fluorescens (PE) foran PMT, er LPF600 og BPF575. Filtrene til at detektere rød fluorescens (CY5) foran PMT er LPF650 og BPF675.
Flowcytometri anvendes hovedsageligt til cellesortering. Med fremskridt inden for computerteknologi, udviklingen af immunologi og opfindelsen af monoklonal antistofteknologi bliver dens anvendelser inden for biologi, medicin, farmaci og andre områder stadig mere udbredte. Disse anvendelser omfatter celledynamikanalyse, celleapoptose, celletypning, tumordiagnose, analyse af lægemiddeleffektivitet osv.
Opslagstidspunkt: 21. september 2023
