(Flowcytometri, FCM) er en celleanalysator, der måler fluorescensintensiteten af farvede cellemarkører. Det er en højteknologisk teknologi udviklet baseret på analyse og sortering af enkeltceller. Det kan hurtigt måle og klassificere størrelse, indre struktur, DNA, RNA, proteiner, antigener og andre fysiske eller kemiske egenskaber af celler, og kan være baseret på indsamlingen af disse klassifikationer.
Flowcytometer består hovedsageligt af følgende fem dele:
1 Flowkammer og fluidiksystem
2 Laser lyskilde og stråleformningssystem
3 Optisk system
4 Elektronik, opbevaring, display og analysesystem
5 Cellesorteringssystem
Blandt dem er laserexcitation i laserlyskilden og stråledannende system den vigtigste måling af fluorescenssignaler i flowcytometri. Intensiteten af excitationslyset og eksponeringstiden er relateret til intensiteten af fluorescenssignalet. Laser er en sammenhængende lyskilde, der kan give en enkelt bølgelængde, høj intensitet og høj stabilitetsbelysning. Det er den ideelle excitationslyskilde til at opfylde disse krav.
Der er to cylindriske linser mellem laserkilden og flowkammeret. Disse linser fokuserer en laserstråle med et cirkulært tværsnit, der udsendes fra laserkilden, til en elliptisk stråle med et mindre tværsnit (22 μm × 66 μm). Laserenergien i denne elliptiske stråle fordeles i overensstemmelse med en normal fordeling, hvilket sikrer ensartet belysningsintensitet for celler, der passerer gennem laserdetektionsområdet. På den anden side består det optiske system af flere sæt linser, nålehuller og filtre, som groft kan opdeles i to grupper: opstrøms og nedstrøms for strømningskammeret.
Det optiske system foran flowkammeret består af en linse og nålehul. Hovedfunktionen af linsen og pinhole (normalt to linser og et pinhole) er at fokusere laserstrålen med et cirkulært tværsnit udsendt af laserkilden til en elliptisk stråle med et mindre tværsnit. Dette fordeler laserenergien i overensstemmelse med en normal fordeling, hvilket sikrer ensartet belysningsintensitet for celler på tværs af laserdetektionsområdet og minimerer interferens fra spredt lys.
Der er tre hovedtyper af filtre:
1: Langpasfilter (LPF) - tillader kun lys med bølgelængder højere end en bestemt værdi at passere igennem.
2: Kortpasfilter (SPF) - tillader kun lys med bølgelængder under en bestemt værdi at passere igennem.
3: Båndpasfilter (BPF) - tillader kun lys i et bestemt bølgelængdeområde at passere igennem.
Forskellige kombinationer af filtre kan dirigere fluorescenssignaler ved forskellige bølgelængder til individuelle fotomultiplikatorrør (PMT'er). For eksempel er filtre til påvisning af grøn fluorescens (FITC) foran PMT LPF550 og BPF525. Filtrene, der bruges til at detektere orange-rød fluorescens (PE) foran PMT'en, er LPF600 og BPF575. Filtrene til påvisning af rød fluorescens (CY5) foran PMT er LPF650 og BPF675.
Flowcytometri bruges hovedsageligt til cellesortering. Med fremskridtene inden for computerteknologi, udviklingen af immunologi og opfindelsen af monoklonalt antistofteknologi bliver dens anvendelser inden for biologi, medicin, farmaci og andre områder stadig mere udbredt. Disse applikationer omfatter celledynamikanalyse, celleapoptose, celletypebestemmelse, tumordiagnose, analyse af lægemiddeleffektivitet osv.
Indlægstid: 21. september 2023
